数字PCR测量转基因质粒DNA比对

数字PCR（digital PCR, dPCR）技术是一种核酸绝对定量技术，与实时荧光定量PCR（Real time quantitative PCR, qPCR）技术不同，dPCR不依赖于标准曲线，可直接绝对定量目标序列的拷贝数浓度[1-2]。dPCR核酸定量方法因具有比qPCR更好的灵敏度和重复性，迅速得到广泛的应用。dPCR技术在痕量核酸样品检测、复杂背景下稀有突变检测[3]和表达量微小差异等方面的优势已被普遍认可，在基因表达、拷贝数变异、癌症标志物稀有突变检测、致病微生物检测、转基因成分测定、高通量测序（NGS）DNA文库定量等[4-10]许多方面具有广阔的应用前景。

国际计量局化学和生物计量咨询委员会（CCQM）下设的核酸分析工作组（NAWG），自2014年开始先后组织了多个基于数字PCR技术的核酸定量测量国际比对[11-15]，包括基因组DNA和质粒DNA的测量，证明了数字PCR的溯源性和可靠性。目前数字PCR方法已经被国际公认为潜在的一级参考测量方法[16-18]，实现对核酸含量的准确测量和量值溯源，因此国内多家单位已经开始使用数字PCR进行标准物质的定值和转基因检测，也有一些公司和第三方的实验室出具基于数字PCR方法的核酸定量检测报告。

随着转基因作物在全世界范围内的广泛种植，其食用安全和环境安全问题一直都备受各国政府及相关国际组织的高度重视，各国也纷纷出台了限量标识制度，转基因测量结果的不可比势必会导致贸易争端。为保障国内开展核酸数字PCR测量的实验室测量结果的准确和可靠，中国计量科学研究院基于获得的转基因水稻和转基因玉米国际互认的测量能力，作为主导实验室，组织开展了此次基于数字PCR的转基因质粒DNA测量比对，以期通过国内比对，与国际等效的测量能力关联，实现转基因测量结果的国际互认。